Synergistic effect of a novel oxymatrine-baicalin combination against hepatitis B virus replication,α smooth muscle actin expression and type I collagen synthesis in vitro

AIM: To study the effect of oxymatrine-baicalin combination (OB) against HBV replication in 2.2.15 cells and α smooth muscle actin (α SMA) expression, type I,collagen synthesis in HSC-T6 cells.METHODS: The 2.2.15 cells and HSC-T6 cells were cultured and treated respectively. HBsAg and HBeAg in the culture supernatants were detected by ELISA and HBV DNA levels were determined by fluorescence quantitative PCR. Total RNA was extracted from HSC-T6 cells and reverse transcribed into cDNA. The cDNAs were amplified by PCR and the quantities were expressed in proportion to β actin. The total cellular proteins extracted from HSC-T6 cells were separated by electrophoresis. Resolved proteins were electrophoretically transferred to nitrocellulose membrane. Protein bands were revealed and the quantities were corrected by β actin.RESULTS: In the 2.2.15 cell culture system, the inhibitory rate against secretion of HBsAg and HBeAg in the OB group was significantly stronger than that in the oxymatrine group (HBsAg, P = 0.043; HBeAg, P =0.026; respectively); HBV DNA level in the OB group was significantly lower than that in the oxymatrine group (P =0.041). In HSC-T6 cells the mRNA and protein expression levels of α SMA in the OB group were significantly lower as compared with those in the oxymatrine group (mRNA, P = 0.013; protein, P = 0.042; respectively); The mRNA and protein expression levels of type I collagen in the OB group were significantly lower as compared with thosein the oxymatrine group (mRNA, P ＜ 0.01; protein, P ＜0.01; respectively).CONCLUSION: OB combination has a better effect against HBV replication in 2.2.15 cells and is more effective against α SMA expression and type I collagen synthesis in HSC-T6 cells than oxymatrine in vitro.     

当归补血汤及其拆方影响肝脏血管新生的药效特点及作用机制

目的观察当归补血汤及其拆方影响肝脏血管新生的抗肝纤维化的药效特点。方法 48只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、当归补血汤组、黄芪组、当归组及索拉非尼对照组。以四氯化碳(CCl4)与高脂低蛋白饮食复合因素诱导肝纤维化模型。通过病理对肝组织形态学进行观察,试剂盒测定血清肝功能、肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS);盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp);电镜观察肝窦内皮窗孔结构;同步辐射X线二维成像观察微血管。组间比较使用单因素方差分析,方差齐时用LSD进行两两比较,方差不齐时用Tamhane's T2。结果当归补血汤及其拆方组白蛋白(Alb)显著提高(P0.05)、AST显著降低(P0.05);当归补血汤及黄芪组ALT显著降低(P0.05);各用药组肝组织Hyp含量显著降低。各用药组血管纹理有不同程度的减少;窗孔数量增加。当归补血汤及其拆方组SOD活性显著升高(P0.05),全方及拆方组NOS显著降低(P0.05),黄芪组MDA显著降低(P0.05),全方组及黄芪组NO显著降低(P0.05)。结论当归补血汤及其拆方具有抗肝纤维化及抗血管新生的作用。其机制可能与保护肝窦内皮细胞损伤、抗脂质过氧化有关,黄芪改善炎症、抗脂质过氧化及NO释放作用较为突出。     

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术研究清肺排毒汤化学成分及小鼠组织分布

目的旨在开展国家卫生健康委员会和国家中医药管理局推荐治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的协定通用处方清肺排毒汤的主要化学成分及小鼠组织分布研究,为其药效物质研究提供参考依据。方法采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS对清肺排毒汤的主要化学成分进行分析,色谱分离采用Acquity UPLC?BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水,梯度洗脱,体积流量0.3mL/min。基于化合物的一级、二级质谱信息,结合对照品比对确认,实现复方主要化学成分的快速、精准识别。在此基础上,对小鼠ig清肺排毒汤后血及组织中的移行成分进行了鉴定,并建立了同步测定麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷、野黑樱苷、甘草苷、金丝桃苷、橙皮苷、黄芩苷、次野鸢尾黄素的定量分析方法,对小鼠ig清肺排毒汤后上述9种入血成分的组织分布进行研究。结果从清肺排毒汤中共鉴定出39种化学成分,ig给药后,在小鼠血清、心、肝、脾、肺、肾中分别鉴定出12、9、9、8、10、10种化学成分。发现9种化学成分可快速吸收并分布到多个组织,在0.5 h时血清及各组织中除黄芩苷之外的8种化学成分的含量均达到峰值,黄芩苷含量峰值出现在2 h或4 h。重点关注的肺组织中0.5 h时各成分的暴露量依次为麻黄碱(2 759.11±784.39)ng/g野黑樱苷(1 819.7±427.28)ng/g伪麻黄碱(880.60±287.97)ng/g苦杏仁苷(304.43±234.70)ng/g橙皮苷(78.33±38.38)ng/g次野鸢尾黄素(8.62±4.66)ng/g黄芩苷(8.53±1.91)ng/g金丝桃苷(7.72±1.63)ng/g甘草苷(7.68±5.19)ng/g;2h时成分含量为麻黄碱(776.61±148.40)ng/g野黑樱苷(325.20±104.17)ng/g伪麻黄碱(212.21±44.63)ng/g黄芩苷(71.72±23.96)ng/g苦杏仁苷(46.39±36.45)ng/g橙皮苷(13.39±10.99)ng/g金丝桃苷(3.11±0.75)ng/g甘草苷(2.86±0.46)ng/g;4 h时各成分质量分数为麻黄碱(327.61±212.59)ng/g野黑樱苷(173.77±58.21)ng/g伪麻黄碱(84.68±59.04)ng/g黄芩苷(49.33±17.06)ng/g苦杏仁苷(1.26±0.26)ng/g。结论研究建立的UHPLC-Q-Orbitrap HRMS方法可实现清肺排毒汤中多种化学成分的快速、准确分析,并明确了ig给药后清肺排毒汤主要成分在小鼠的组织分布情况,为后续清肺排毒汤的药效物质基础研究及进一步的临床应用提供了药动学信息和指导。     

锦红片联合西医常规疗法治疗急性腹腔感染脓毒症的临床观察

目的:观察锦红片联合西医常规疗法治疗急性腹腔感染脓毒症的临床疗效。方法:将62例急性腹腔感染脓毒症患者随机分为治疗组和对照组,每组31例。对照组在西医常规疗法的基础上加用锦红片安慰剂,治疗组在西医常规疗法的基础上加用锦红片。治疗14 d后,观察两组临床疗效,比较中医证候积分、急性生理与慢性健康(APACHE)Ⅱ评分、实验室指标的变化情况及并发症的发生率、病死率。结果:①治疗组、对照组并发症发生率分别为3.2%、35.5%,病死率分别为0.0%、19.4%,治疗组并发症发生率、病死率均低于对照组(P0.05)。②治疗组、对照组总有效率分别为96.8%、64.5%,治疗组临床疗效优于对照组(P0.05)。③治疗前后组内比较,治疗组中医证候总积分及各分项积分均降低(P0.05),对照组发热、腹胀、气促、烦躁、排便不畅积分及中医证候总积分降低(P0.05);组间治疗后比较,治疗组中医证候总积分及各分项积分低于对照组(P0.05)。④治疗前后组内比较,治疗组APACHEⅡ评分降低(P0.05),对照组APACHEⅡ评分差异无统计学意义(P0.05);组间治疗后比较,治疗组APACHEⅡ评分低于对照组(P0.05)。⑤治疗前后组内比较,治疗组白细胞计数(WBC)及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-2(IL-2)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平均降低(P0.05),对照组WBC、TNF-α、CRP、PCT水平降低(P0.05);组间治疗后比较,治疗组WBC、TNF-α、IL-2、CRP、PCT水平均低于对照组(P0.05)。结论:与单纯西医常规疗法相比,加用锦红片有利于提高急性腹腔感染患者的临床疗效,改善患者的临床症状,减少并发症的发生,降低病死率;其机制可能与改善患者的急性炎症状态有关。     

Intestinal Microecology: An Important Target for Chinese Medicine Treatment of Non-alcoholic Fatty Liver Disease

Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has become one of the most common chronic liver diseases worldwide, causing serious economic and medical burdens. Currently, Chinese medicine (CM) has become an important means in treating NAFLD in China. Intestinal microecology (IM) is an important part of the internal environment in the human body and is involved in the occurrence and development of NAFLD. In this paper, the authors systematically discuss the significance of IM in the pathogenesis of NAFLD and the current status of research on the CM treatment of NAFLD via IM regulation. In combination with our own research practice, we propose that IM is an important target for the treatment of NAFLD with CM and formulate plans for future research to target limitations existing in current studies.     

基于差异蛋白质组学解析一贯煎对大鼠肝硬化形成的影响

目的：基于差异蛋白质组学探讨一贯煎干预肝硬化的部分效应机制。 方法：48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组（n=12）及造模组（n=36）,采用50％四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）-橄榄油溶液1 mL/kg腹腔注射（2次/周,共9周）制备大鼠肝硬化模型。于开始造模后3周和6周分别随机处死6只大鼠,作药物干预前的动态观察,其余24只模型大鼠于开始造模后第7周首日随机分为模型组（n=12）及一贯煎干预组（n=12）。大鼠于第9周末全部处死取材。双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）分离肝组织总蛋白,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱及数据库查询鉴定差异表达蛋白质;差异蛋白质铜/锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn superoxide dismutase, Cu/Zn SOD）和DJ-1表达采用蛋白印迹法及免疫组织化学方法进行验证。 结果：获得分辨率高、重复性好的肝组织2-DE图谱,经质谱鉴定的50个差异蛋白质中,与氧化应激相关的5个蛋白质分别是Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽合成酶、谷胱甘肽S-转移酶Yb-1亚基、醛酮还原酶7,A2。与正常组大鼠比较,模型组肝组织Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2的表达均显著降低,其中Cu/Zn SOD、醛酮还原酶7,A2在造模3周、6周及9周后呈梯级下降,而DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶于造模3周、6周及9周后均呈低水平表达;谷胱甘肽合成酶表达显著升高。治疗结束后与模型组比较,一贯煎组Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2表达均明显增高,谷胱甘肽合成酶表达显著降低。蛋白印迹法及免疫组织化学验证了Cu/Zn SOD、DJ-1在蛋白表达水平的差异,与蛋白质组学结果基本一致。 结论：抗氧化应激功能降低是CCl4致大鼠肝硬化的重要病理环节,提高抗氧化应激功能相关蛋白的表达可能是一贯煎治疗CCl4所致大鼠肝硬化的主要效应机制。     

栀子水提液对小鼠急性肝损伤的治疗及肝毒性作用观察

目的：观察有肝毒性的栀子治疗小鼠急性肝损伤时会否加重肝损伤和健脾保肝方是否有助于栀子的药效。方法：c57bl雄性小鼠48只,随机分为正常组、模型组、栀子组、健脾保肝组、栀子合健脾保肝方组。正常组小鼠灌胃饮用水,其余小鼠均以相应药物灌胃,连续5天。第6天,除正常组小鼠,其余各组小鼠给予0.5%CCl4/橄榄油溶液,0.01mL·g-1腹腔注射,17h后处死。标本作病理和生化检测。结果：模型组肝细胞普遍变性,有散在的点状或灶状的坏死及炎细胞浸润;栀子组肝细胞损伤情况较模型组轻;健脾保肝组的变性肝细胞更少;栀子合健脾保肝组肝细胞的变性为4组中最轻者,未见肝细胞坏死。生化检测示栀子组和栀子合健脾保肝组的ALT活性明显较模型组轻[（597.89±364.17）、（466.90±222.26）vs（1008.30±460.73）U·L-1,P〈0.05,P〈0.01],栀子组、健脾保肝组、栀子合健脾保肝方组的AST活性均较模型组明显降低[（974.56±146.55）、（1033.13±137.01）和（721.33±127.2）vs（1238.7±260.51）IU·L-1,P〈0.01或P〈0.05]。结论：相当于临床成人剂量18g的栀子能够减轻CCl4所致的小鼠急性肝损伤;健脾保肝方与栀子配伍,增效或减毒,治疗急性肝损伤的作用更佳。     

丹参及其组分丹参酚酸B盐对门静脉高压小鼠肝脏微循环的影响

目的：研究活血化瘀中药丹参及其组分丹参酚酸B盐（salvianolic acid B,SA-B）对内皮素-1（endothelin-1,ET-1）所致门静脉高压（portalhypertension,PHT）模型小鼠肝脏微循环的影响。 方法：昆明种小鼠84只,随机分为模型组、内皮素A受体（endothelin A receptor,ETAR）阻断剂组、黄芪组、黄芪多糖组、延胡素组、丹参组、SA-B组,每组12只。预先灌胃等量药物或蒸馏水,1次／d,共3d。用微量注射泵以80μL／min速度从尾静脉注射ET-1（1．6μg／kg）,建立门静脉高压模型。每组中6只小鼠用激光多普勒测定尾静脉注射ET-1前后肝脏平均血流灌注量;另6只活体观察注射ET-1前后肝脏微循环流速。 结果：各组注射ET—1后肝脏平均血流灌注量均有不同程度的下降,但SA—B组和ETAR阻断剂组下降幅度较模型组小（P〈0．01）;黄芪组和黄芪多糖组下降幅度与模型组接近,与SA—B组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;SA—B组则与ETAR阻断剂组作用相当。从各组肝脏微血管流速的变化来看,SA—B组和ETAR阻断剂组流速下降幅度均小于模型组（P〈0．05,P〈0．01）;丹参组、SA—B组的下降幅度与ETAR阻断剂组相比,差异无统计学意义。 结论：丹参和SA-B能对抗ET-1引起的肝脏平均血流灌注量和微循环流速降低,这可能是其改善门静脉高压时肝脏微循环的机制之一。     

玉屏风散预防慢性肾炎患者感冒及对免疫调节的临床研究

目的：通过观察玉屏风散对慢性肾炎患者感冒的预防及对免疫的影响,为玉屏风散有效预防慢性肾炎患者感冒提供临床依据。方法：62例西医诊断为慢性肾炎,中医辨证为肺肾气虚证、气阴两虚证的感冒易感患者,随机分为试验组31例,对照组31例。两组均在西医诊疗常规基础上,试验组予六味地黄丸加味（加生黄芪、党参）合玉屏风散,对照组予六味地黄丸加味（加生黄芪、党参）;煎汤口服,每日1帖,分2次服用;连续服药2个月。随访2个月,记录其感冒频数、两组治疗前后相关症状评分、相关免疫指标及肾功能的影响。结果：治疗后,复感例数试验组（6例）较对照组（13例）减少,差异具有统计学意义（P〈0.05）;临床证候缓解总有效率试验组（74.2%）较对照组（48.4%）高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;临床症状总积分试验组（15.16±6.47分）较对照组（20.71±4.95分）减轻,差异具有统计学意义（P〈0.05）。治疗后,辅助性T细胞CD4＋试验组（41.43±7.06%）较对照组（35.45±8.88%）升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;抑制性T细胞CD8＋试验组（30.22±5.61%）较对照组（37.61±8.91%）下降,差异具有统计学意义（P〈0.01）;CD4＋/CD8＋试验组（1.44±0.41）较对照组（1.04±0.49）升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）。治疗后外周血象中,中性粒细胞数量试验组[（4.51±2.17）×109/L]较对照组[（3.39±1.42）×109/L]升高,差异具有统计学意义（P〈0.01）;淋巴细胞数量试验组[（2.04±0.85）×109/L]与对照组[（1.88±0.66）×109/L]比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。治疗后肾功能,血清肌酐试验组（85.87±40.99μmol/L）与对照组（97.12±57.70μmol/L）比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;血清尿素氮试验组（5.72±3.00 mmol/L）与对照组（6.12±2.61 mmol/L）比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：玉屏风散对预防慢性肾炎患者感冒及改善症状有显效;能升高CD4＋、CD4＋/CD8＋、中性粒细胞,降低CD8＋,从而调节患者免疫。     

刺山柑果实提取物对CCl_4诱导的小鼠肝纤维化的保护作用

目的:研究刺山柑果实提取物对四氯化碳(CCl_4)诱导的小鼠肝纤维化的保护作用及可能机制。方法:45只C57BL小鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方组(FZHY组,4 g/kg)、刺山柑低剂量组(0.93 g/kg)和高剂量组(2.80 g/kg),每组9只。除正常组外,其余各组小鼠腹腔注射10%CCl_4,每次2 ml/kg,每周3次,连续8周,诱导小鼠实验性肝纤维化模型。造模第5周起,各药物组灌胃给予相应剂量的药液,连续4周。末次给药后,采集血清和肝脏样本。试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性以及总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)水平。HE染色和天狼猩红染色后,光镜下观察肝组织形态学变化。试剂盒检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性。Western blot检测肝组织自噬相关蛋白LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ的表达水平。结果:①与模型组相比,FZHY组和刺山柑低、高剂量组小鼠的ALT、AST、ALP、TBIL水平显著降低(P0.05,P0.01),TP和ALB水平显著升高(P0.01);且刺山柑高剂量组小鼠的ALT和AST水平明显低于低剂量组(P0.05,P0.01)。②HE染色和天狼猩红染色观察显示,模型组小鼠肝细胞可见大面积出血性坏死,纤维组织广泛增生形成间隔,并将肝组织包围形成假小叶;与模型组相比,FZHY组及刺山柑低、高剂量组小鼠的肝组织形态均有不同程度改善,肝细胞坏死明显减少,同时纤维增生有所减轻,假小叶逐渐消失;且刺山柑高剂量组的改善作用优于低剂量组。半定量分析结果表明,FZHY组和刺山柑高剂量组的胶原阳性染色面积占比较模型组显著降低(P0.05)。③与模型组相比,FZHY组及刺山柑低、高剂量组小鼠肝组织Hyp含量显著降低(P0.01),SOD水平显著升高(P0.01),MDA水平显著降低(P0.05,P0.01)。④Western blot结果显示,刺山柑低、高剂量组小鼠肝组织LC3-Ⅱ蛋白表达较模型组显著上调(P0.01),但LC3-Ⅰ蛋白表达无明显变化。结论:刺山柑果实提取物可有效减轻CCl_4诱导的小鼠肝纤维化,明显改善模型小鼠的肝功能及病理损伤,其作用机制与抑制肝脏胶原纤维生成、清除氧自由基和促进线粒体自噬有关。